z dawką nasycającą (100 ug, patrz poniżej) przeciwciała anty-DNGR-1 skoniugowanego z Alexa Fluor 488 lub z taką samą ilością podobnie skoniugowanego kontrolnego dopasowanego izotypu. Analiza całkowitej liczby komórek śledziony lub węzłów chłonnych 16 godzin po wstrzyknięciu wykazała specyficzne znakowanie CD8 (3 + DC i pDC, chociaż intensywność sygnału była znacznie większa na dawnym typie DC (CD8a + DC MFI. 350. 400 w porównaniu z pDC MFI <65 <70; Figura 3A i dodatkowa Figura 7). Żadna inna populacja leukocytów nie została wyznakowana tą procedurą, co pokazuje niezwykłą swoistość in vivo anty-DNGR-1 (figura 3A i dodatkowa figura 7). Przeciwnie, anty-DEC-205 wiąże się z wieloma typami komórek, gdy są stosowane w tej samej dawce i, oprócz CD8 (3 + DC, silnie znakuje CD11clo pochodzące z skóry DC i plami komórki CD11c-ujemne (dodatkowa Figura 7). Warto zauważyć, że nawet lokalne podawanie małych ilości znakowanego przeciwciała anty-DNGR-1 do łapek stóp było wystarczające do oznaczenia śledzionowych podzbiorów DC (Figura 3B). Niskie dawki przeciwciała (np. 2 .g) preferencyjnie znakowały CD8 (3 + DC nad pDC, zgodnie z względnymi poziomami ekspresji DNGR-1 w 2 podgrupach i sugerując, że takie niskie poziomy można zastosować do selektywnego nakierowywania na CD8y + DCs in vivo (Figura 3B). Wnioskujemy, że podawanie anty-DNGR-1 można stosować do specyficznego znakowania CD8a + cDC i, w mniejszym stopniu, pDCs in vivo. Figura 3 Specyficzne znakowanie CD8a + DC i pDC in vivo mAb anty-DNGR-1. (A) Myszom wstrzyknięto dożylnie 100 .g skoniugowanego z Alexa Fluor 488 (3 przeciwciała anty-DNGR-1 (7H11) lub dopasowanego pod względem izotypu (szczurzy IgGl), a splenocyty analizowano dzień później. Wykresy punktowe pokazują CD11c w porównaniu z Alexa Fluor 488 w myszach z wstrzykniętym przeciwciałem anty-DNGR-lp (prawy panel) lub szczurzy IgGl (lewy panel). Wykresy konturowe pokazują CD4 kontra CD8. oraz profile Ly6C versus B220 populacji CD11chi i CD11cint DNGR-1 + zakreślone na wykresie punktowym. Liczby reprezentują odsetek zdarzeń we wskazanej bramce. (B) Myszom wstrzyknięto sc ze wskazanymi dawkami skoniugowanego antygenu Alexa Fluor 488a anty-DNGR-1 (7H11) lub pojedynczej dawki dopasowanej izotypowo kontroli (szczurzy IgGl, 20 .g / mysz) i analizowano splenocyty dzień później. Histogramy wykazują wybarwianie CD8a + DC lub pDC uzyskanych przy różnych dawkach anty-DNGR-1 (zielona linia, 0,5 .g, niebieska linia, 2 .g, czerwona linia, 5 .g, gruba czarna linia, 20 .g) lub dopasowany do izotypu (cienka czarna linia). Dolny panel pokazuje MFI z anty-DNGR-1 podzieloną przez otrzymaną z 20 .g kontroli dopasowanej izotypowo dla każdego podzbioru DC lub dla komórek śledziony innych niż DC. DNGR-1 jest receptorem endocytowym. Ponieważ wiele lektyn typu C na komórkach szpikowych służy jako receptory endocytowe (34, 35), testowaliśmy zdolność internalizacji DNGR-1 z powierzchni komórki. BMD Flt3L znakowano w temperaturze 4 ° C biotyną anty-DNGR-1, płukano i inkubowano w 4 ° C lub 37 ° C przez różne okresy czasu przed barwieniem streptawidyną-PE. Barwienie podtypu CD8. + – podobnego do populacji BMDC Flt3L zmniejszono 4-krotnie po 2 godzinach inkubacji w 37 ° C, przy minimalnym spadku komórek inkubowanych w 4 ° C (Figura 4A). Analiza konfokalna komórek wybarwionych koniugatami anty-DNGR-1 Alexa Fluor 488 ujawniła obecność mAb w przedziałach wewnątrzkomórkowych po 2 godzinach inkubacji w 37 ° C (Figura 4B). Podobne dane uzyskano w heterologicznym typie komórek transfekowanym w celu ekspresji DNGR-1 (dane nie pokazane). Zatem DNGR-1 może pośredniczyć w dostarczaniu związanego przeciwciała do szlaku endocytarnego. Figura 4Edocytoza mAb anty-DNGR-1 w BMDC Flt3L. (A) BMDC Flt3L znakowano mAb anty-DNGR-1 7H11 jak wyszczególniono w Methods i inkubowano przez wskazany czas w 4 ° C lub 37 ° C przed dodaniem streptawidyny-PE. Dane reprezentują MFI dla podzbioru CD24hi. Histogramy przedstawiają rzeczywiste profile barwienia: gruba czarna linia, barwienie streptawidyną-PE natychmiast po oznakowaniu biotyną anty-DNGR-1; niebieska linia, po 2 godzinach w 4 ° C; czerwona linia, po 2 godzinach w 37 ° C; cienka czarna linia, kontrola dopasowana izotypowo. (B) BMD Flt3L znakowano koniugowanymi mAb anty-DNHR-1 Alexa Fluor 488a (prawe panele 7H11) lub kontrolą izotypową (szczurzy IgGl, lewe panele) i inkubowano przez 2 godziny w 4 ° C (górne panele) lub 37 ° C (dolne panele) przed analizą konfokalną. Obraz przedstawia pojedynczą sekcję optyczną (<0,7 .m). Zwróć uwagę na punktowe barwienie wewnątrz komórek inkubowanych w 37 ° C, co wskazuje na endocytozę. Oryginalne powiększenie, × 630. Anty-DNGR-1 może dostarczać antygen in vivo do CD8a + DC dla prezentacji krzyżowej MHC klasy I. Aby ocenić, czy zdolność endocytozy DNGR-1 i jej selektywny model ekspresji można wykorzystać jako środek dostarczający antygenu do prezentacji komórkom T, przetestowaliśmy model prezentacji krzyżowej [patrz też: dyslipidemia aterogenna, hipertriglicerydemia, czepota puszysta ]
Random entries
Zniszczenie nosowej przegrody przez zakażenie Aspergillus po autologicznym transplantacji szpiku kostnego
Przedstawiamy przypadek 15-letniego chłopca z martwicą przegrody nosowej z powodu infekcji Aspergillus po autologicznym przeszczepie szpiku kostnego w ostrej białaczce szpikowej. Leczenie należy często rozpoczynać przed ostateczną diagnozą, biorąc pod… Read More Zniszczenie nosowej przegrody przez zakażenie Aspergillus po autologicznym transplantacji szpiku kostnego
Terapia nowotworowa u myszy poprzez celowanie antygenem w nowatorską lektynę typu C ograniczoną do DC
DevURLPodtyp mysiego CD8a + DC jest doskonały w prezentacji krzyżowej antygenu, co może wywołać silne odpowiedzi CTL. Receptor umożliwiający specyficzne kierowanie antygenu do tego podzestawu i jego odpowiednika u ludzi… Read More Terapia nowotworowa u myszy poprzez celowanie antygenem w nowatorską lektynę typu C ograniczoną do DC
Tags
allegro pok
cysta naskórkowa
cystoskopia boli
cytologia płynna
czepota puszysta
czerniak złośliwy rokowania
czy psy mogą jeść czekoladę
dehydratacja krążków międzykręgowych leczenie
dieta wrzodowa jadłospis
dlaczego psy nie mogą jeść czekolady
dolargan ulotka
dom na przeklętym wzgórzu cda
dychawica krzyżówka
dyslipidemia aterogenna
dystymia test
embolizacja naczyniaka
erytrocyty w cytologii
hipertriglicerydemia
kot nie chce jeść
szpik w kości krzyżówka
tureckie allegro