VAMP8 to v-SNARE, który pośredniczy w egzocytozie podstawno-bocznej w mysim modelu alkoholowego zapalenia trzustki

U gryzoni i ludzi wykazano, że ekspozycja na alkohol predysponuje trzustkę do cholinergicznej lub wirusowej indukcji zapalenia trzustki. Wcześniej opracowaliśmy model gryzonia, w którym ekspozycja na dietę etanolową (EtOH), a następnie stymulacja karbacholem (Cch), przekierowuje egzocytozę z wierzchołkowej do podstawno-bocznej błony komórek groniastych, powodując ektopową aktywację enzymu zymogenu i zapalenie trzustki. To przekierowanie egzocytozy obejmuje rozpuszczalny kompleks receptora przyłączania NSF (SNARE) składający się z syntaksyny-4 i białka związanego z synaptacją o wielkości 23 kDa (SNAP-23). W tym artykule badano rolę błony komórkowej SNAR zymogenu (ZG) związanego z pęcherzykiem 8 (VAMP8) w pośredniczeniu egzocytozy podstawno-bocznej. U myszy WT ekspozycja EtOH na działanie in vitro lub dieta EtOH zmniejszała uwalnianie amylazy stymulowanej przez Cch przez przekierowanie egzocytozy wierzchołkowej do błony podstawno-bocznej, prowadząc do alkoholowego zapalenia trzustki. Dalszą redukcję sekrecji zymogenu, spowodowaną przez blokadę zarówno egzikwizy wierzchołkowej, jak i boczno-bocznej, oraz w wyniku łagodniejszego wywoływania alkoholowego zapalenia trzustki obserwowano w Vamp8. /. myszy w odpowiedzi na te terapie. Ponadto, mimo że ZG zgromadziły się w Vamp8. /. komórki groniaste, fuzje ZG-ZG były zmniejszone w porównaniu z fuzjami w komórkach groniastych WT, jak wizualizowano za pomocą mikroskopii elektronowej. To zmniejszenie fuzji ZG może wyjaśniać zmniejszoną efektywność egzocytozy wierzchołkowej w Vamp8. /. acini. Odkrycia te wskazują, że VAMP8 to ZG-SNARE, który pośredniczy w egzocytozie podstawno-bocznej w alkoholowym zapaleniu trzustki i że VAMP8 ma krytyczne znaczenie dla homotypowej fuzji ZG-ZG. Wstęp Chociaż poczyniono znaczne postępy w wyjaśnianiu mechanizmów urazów wywołanych zatruciem alkoholowym w kilku narządach (wątroba, mózg i serce), dopiero niedawno odkryto mechanizmy uszkodzenia trzustki za pośrednictwem alkoholu (1, 2 ). W przypadku ludzi i modeli gryzoni ostre lub przewlekłe podawanie alkoholu do zewnątrzwydzielniczej trzustki nie powodowało znacznych obrażeń, ale predysponowało organ do wywoływania czynników (np. Poposiłkowa cholinergiczna lub cholecystokinina [CCK], infekcja wirusowa, dieta wysokotłuszczowa). następnie doprowadził do zapalenia trzustki. Pojawił się doskonały model alkoholowego zapalenia trzustki, który symuluje chorobę człowieka, która wiąże się z chroniczną ekspozycją na dietę alkoholową, a następnie submaksymalną karbacholem (Cch) lub stymulacją CCK (3). We wcześniejszych badaniach postulowaliśmy mechanizm ostrego zapalenia trzustki wywołanego przez supramaksymalną stymulację CCK u szczurów, co wiązało się z przekierowaniem egzocytozy, która normalnie występuje przy wierzchołkowej błonie plazmatycznej (PM) na boczno-boczną powierzchnię PM, przy czym następująca ektopowa aktywacja enzymu zymogenu w przestrzeń śródmiąższowa prowadzi do zapalenia trzustki (4). Stosując szczurzy model 6-tygodniowej diety etanolowej (EtOH), która doprowadziła do stężenia alkoholu we krwi równoważnego poziomowi obserwowanemu w zatruciu klinicznym (5), po którym następowały iniekcje ip submaksymalnych stężeń Cch lub CCK symulujących stymulację poposiłkową, obserwowano blokadę wierzchołkową i przekierowanie egzocytozy do podstawno-bocznego PM, a także zapalenie trzustki (6. 8). W tych badaniach zaczęliśmy ujawniać przypuszczalne molekuły, które pośredniczą w egzocytozie podstawno-bocznej, co uważamy za zgodne z paradygmatem hipotezy. SNARE. (9, 10). W szczególności Munc18c związał się z syntaksyną-4 (Syn-4) na podstawno-bocznym PM, co zapobiegło wiązaniu Syn-4 z pokrewnymi białkami rozpuszczalnego białka przyłączającego NSF (SNARE) (4, 6. 8). Wstępne traktowanie acini ED lub EtOH, a następnie submaksymalna stymulacja Cch (6) lub CCK (7, 8) indukowała fosforylację treoniny za pośrednictwem PKC-3 Munc18c, która powodowała jego przemieszczenie z Syn-4, i aktywowany montaż Syn-4 z synaptycznym związanym białko o masie cząsteczkowej 23 kDa (SNAP-23) i białkach błonowych związanych z pęcherzykami (VAMP), tworząc kompleks SNARE, który postulowaliśmy w pośredniczeniu egzocytozy podstawno-bocznej. Odrębny rozkład syntaksyn egzocytotycznych w komórce groniastej trzustki, w tym Syn-2 w apikularnym PM, Syn-3 na granulce zymogenu (ZG) i Syn-4, przy podstawno-bocznym PM, dyktuje te odpowiednie kompartmenty docelowe do fuzji egzocytotycznej, które obejmują egzocytozę wierzchołkową (ZG z apikalnym PM), homotypową fuzję ZG-ZG i odpowiednio egzoptozę podstawną (10, 11). Te syntaksy wiążą SNAP-23, który jest obecny we wszystkich tych przedziałach (10, 12). Homotypowa fuzja ZG-ZG, obserwowana jako sekwencyjna egzocytoza w komórkach groniastych trzustki, zapewnia, że zawartość zymogenu opróżnia się z bardzo ograniczonej apical PM przestrzeni komórki groniastej z maksymalną wydajnością podczas stymulacji fizjologicznej (4, 13)
[hasła pokrewne: cysta naskórkowa, dystymia test, kot nie chce jeść ]