VAMP8 to v-SNARE, który pośredniczy w egzocytozie podstawno-bocznej w mysim modelu alkoholowego zapalenia trzustki ad 8

W WT acini, grupy CD i ED wykazały 43,0. 6.1 ZG / odcinek komórki i 50,3. 4.1 ZG / odcinek komórki, z wierzchołkowymi prześwitami 2,8. 0,6 i 2,6. 0,7 m2 m2, odpowiednio. W grze Vamp8. /. grupy acini, CD i ED wykazały 98,5. 7.7 ZG / odcinek komórki i 112,2. 6.9 ZG / odcinek komórki, z wierzchołkowymi prześwitami 2,6. 0,6 i 2,7. 0,7 m2 m2, odpowiednio. Pomiary te są bardzo podobne do tych stwierdzonych w stanach niestymulowanych (patrz wyżej) i dlatego wskazują, że blokada wierzchołkowa opisana powyżej była rzeczywiście spowodowana stymulacją Cch w tle ED. Wszystkie powyższe dane dotyczące liczby ZG, ich dystrybucji komórkowej i powierzchni światła są podsumowane i przeanalizowane na Supplemental Figure 2, A, B i F. Następnie przeanalizowaliśmy rozkład i zachowanie ZG wzdłuż bocznego PM i przestrzeni śródmiąższowej . ZG uznano za zadokowane, jeśli dotykały PM lub w odległości 50 nm od PM. W tkankach trzustki podawanych WT ED leczenie Cch wywoływało dużą liczbę ZG, które miały być zadokowane na bocznym PM, z wieloma poddanymi egzocytozie. Analiza morfometryczna tych zdarzeń związanych z egzocytozą boczną wykazała, że znaczące 16% ZG (39,2. 1,3 ZG / część komórkowa) zostało zadokowane lub stapiało się z bocznym PM, podczas gdy wszystkie inne grupy WT wykazały mniej niż 3% zadokowanych ZG (lub poddawana egzocytozie) na boczny PM (ED / sól fizjologiczna, 1,6. 0,3 ZG / fragment komórki, CD / roztwór soli, 0,8 . 0,2 ZG / fragment komórki, CD / Cch, 0,9. 0,2 ZG / część komórki). W przeciwieństwie do Vamp8. /. Leczona ED grupa Cch, pomimo dużej ilości ZG, wykazała bardzo niewielką liczbę ZG (mniej niż 1%) zadokowany lub egzocytowanie na bocznym PM (1,1. 0,4 ZG / część komórkowa), jak miało to również miejsce w przypadku reszty of the Vamp8. /. grupy (podsumowane w Suplementalnej Figurze 2C). Ponadto, w acini poddanym działaniu WT ED z dodatkiem Cch, 56% z tych dokowanych lub egzocytujących ZG w bocznym PM występowało w odległości większej niż 4 .m od kompleksów łączących, podczas gdy nie obserwowano żadnej bocznej egzocytozy w takiej odległości od kompleksy łączące z dowolnymi innymi grupami (w tym z grupą Vamp8 (3 / OC / Cch, zestawione w Suplementowej Figurze 2D). Boczna egzocytoza w tkankach trzustki WT ED / Cch (Figura 6) doprowadziła do stanu zapalnego w przestrzeni śródmiąższowej, co spowodowało przerwanie bocznego PM i nekrotyczne zmiany jądra i organelli wewnątrzkomórkowych (Figura 7). Czwartą cechą jest zatem to, że ED stanowi znaczną część bocznego PM oddziałującego na egzocytozę, predysponując do zapalenia trzustki, a zdarzenia te były blokowane przez delecję VAMP8. Na koniec zbadaliśmy fuzje ZG-ZG. W tkance trzustki poddanej działaniu WT ED traktowanej CW (Figura 7), obserwowaliśmy dużą liczbę fuzji ZG-ZG (10,6. 1,1 fuzji / sekcji komórkowej, podsumowane w Suplementowej Figurze 2E). Tutaj powiększone obrazy na Figurach 6 i 7 pokazują różne etapy fuzji ZG-ZG, w tym fuzje złożone wielu ZG, z których niektóre częściowo opróżniły ich zawartość. Te zdarzenia fuzji ZG-ZG były blokowane przez wstępną obróbkę Atp (ED / Atp plus Cch, fuzje 1,7. 0,6 / sekcja komórki) do tego samego poziomu, co obserwowano w grupie potraktowanej ED soli fizjologicznej (fuzja 1,5. 0,4 / odcinek komórkowy). W przeciwieństwie do tego, znaleźliśmy bardzo małą liczbę fuzji ZG-ZG w Vamp8. /. Grupa traktowana ED Cch (fuzja 0,5. 0,2 / sekcja komórki). Podsumowując, piątą cechą jest to, że leczenie ED i Cch indukowało fuzję ZG-ZG, która wymagała VAMP8. VAMP8 ZG preferencyjnie przemieszczają się do boczno-bocznej powierzchni PM. Ponieważ delecja VAMP8 zakłócała egzocytozę na podstawowym i bocznym PM, sugerowałoby to, że VAMP8 może być V-SNARE, który przenosi ZG do tych miejsc egzocytotycznych. Pokazujemy powyżej, że wstępne traktowanie EtOH, a następnie stymulacja 3 (3M Cch, w sposób przewidywalny wywoływał egzocytozę podstawną. Zastosowaliśmy ten protokół do analizy lokalizacji VAMP8 w WT acini za pomocą konfokalnej mikroskopii immunofluorescencyjnej. Figura 8 pokazuje, że w niestymulowanym acini (KRH / KRH) trzustki, zabarwione na VAMP8 struktury granulek w wierzchołkowych biegunach (w sąsiedztwie prześwitu apikalnego bogatego w aktynę), ale wydawało się, że są bardziej zdyspergowane. Inkubacja z samym EtOH nie wykazała zmian w barwieniu VAMP8 (dane nie przedstawione). Po submaksymalnej stymulacji (3. M) Cch (KRH / Cch), zligowane z VAMP8 ZG okazały się bardziej zwarte i zatłoczone w kierunku wierzchołkowego światła, co sugeruje, że fuzja ZG-ZG zachodzi. Co godne uwagi, wstępne traktowanie EtOH (20 mM, h), a następnie stymulacja submaksymalna (3. M) Cch (EtOH / Cch) indukowała te struktury VAMP8-dodatnie, które były zlokalizowane w kierunku bazowego i bocznego PM, a znacznie mniej w obrębie wierzchołkowego bieguna, przylegając szczytowe kanaliki przewodowe
[podobne: allegro pok, dyslipidemia aterogenna, dehydratacja krążków międzykręgowych leczenie ]