VAMP8 to v-SNARE, który pośredniczy w egzocytozie podstawno-bocznej w mysim modelu alkoholowego zapalenia trzustki ad 10

Jednakże po dysocjacji Munc18b nie ulegał degradacji, jak zaobserwowano w przypadku Munc18c (4, 6. 8) (Figura 9, B i C oraz Suplementowa Figura 3A). Te wyniki sugerują, że kompleks Syn-2 / SNAP-23 / VAMP2 SNARE pośredniczy w egzocytozie wierzchołkowej i że VAMP8 może nie uczestniczyć w samej egzocytozie wierzchołkowej, co wyjaśnia, dlaczego egzocytoza wierzchołkowa pozostała nietknięta w VAMP8 acini. Warto zauważyć, że przy 20 mM EtOH plus stymulacja 3. M Cch, która blokowała egzocytozę wierzchołkową, powstał kompleks Syn-2 / SNAP-23 wraz z przesunięciem Munc18b z PM, ale to nie doprowadziło do pełnego utworzenia kompleksu SNARE z VAMP2. Na koniec zbadano rolę Syn-3 w fuzji ZG-ZG (10, 11) w WT acini przez immunoprecypitację Syn-3 z błon ZG (Figura 9C). W stanie podstawowym (KRH) Syn-3, podobny do Syn-2, silnie związany z Munc18b (32) i nie wiązał VAMP8 (lub VAMP2). Po stymulacji 3. M Cch (powodującej sekwencyjne fuzje ZG-ZG), a nawet moreso po 20 mM EtOH plus 3. M Cch (powodując fuzję ZG-ZG z blokadą apikalną), Syn-3 stał się zdolny do wiązania VAMP8 i SNAP-23. . Munc18b ponownie zaobserwowano, że wypiera się z błon ZG, w szczególności z 20 mM EtOH plus stymulacja 3. M Cs. Nie było wiązania kompleksu Syn-3 / SNAP-23 z VAMP2. Te wyniki sugerują, że VAMP8 (a nie VAMP2) w kompleksie z Syn-3 i SNAP-23 może być przypuszczalnym kompleksem SNARE pośredniczącym w fuzji ZG-ZG. Dyskusja Komórka trzustkowa z komórek groniastych to doskonały model spolaryzowanych komórek (poprzednio uformowany model a-classic.) W celu zbadania różnych procesów egzocytarnych, w tym egzocytozy wierzchołkowej, fuzji granulek granulek i egzocytozy podstawnej (33, 34). Podstawą dla ZG, które mają być ukierunkowane na te odrębne kompartmenty egzocytarne, jest dyktowana przez hipotezę SNARE hipoteza o swoistości przedziałowej, która obejmuje różne kompleksy SNARE i ich pokrewne białka Munc18, które regulują ich montaż (9, 35, 36). Podczas gdy egzocytoza wierzchołkowa, to jest fuzja ZG z apikalnym PM, a następnie kolejne fuzje ZG-ZG są wywoływane przez stymulację fizjologiczną, stymulacja patologiczna (supramaksymalna CCK lub Cch, uczulenie na alkohol do submaksymalnej stymulacji Cch lub CCK) przekierowuje egzocytozę do boczno-bocznej powierzchni PM , które postulowaliśmy jako czynnik przyczyniający się do alkoholowego alkoholowego zapalenia trzustki (6. 8, 37). W tej pracy użyliśmy Vamp8. /. myszy i zastosowano protokół alkoholowego zapalenia trzustki, symulując ludzką chorobę, aby przeanalizować niektóre z tych procesów. Byliśmy w stanie wyjaśnić rolę białka VAMP8 ZG Snare w egzocytozie podstawno-bocznej jako podstawowym podłożu dla alkoholowego zapalenia trzustki i jego udziału w fuzji ZG-ZG. Poniżej przedstawiono nasze główne wnioski, które podsumowano na ryc. 10. Ryc. 10 Rola VAMP8 w regulowanej egzocytozie w komórkach groniastych trzustki i patologicznej egzocytozie podstawno-bocznej leżącej u podstaw alkoholowego zapalenia trzustki. Przewlekła ekspozycja na ED po poposiłkowej submaksymalnej stymulacji Cch powoduje blokadę egzocytozy wierzchołkowej i przekierowuje egzocytozę do podstawowego i bocznego PM. W tym przypadku EtOH z małą dawką Cch powoduje przesunięcie Munc18c z boczno-bocznego PM, który aktywuje Syn-4 na podstawno-bocznym PM, aby związać SNAP-23 i VAMP8 z ZG, aby utworzyć egzocytowy kompleks SNARE zdolny do pośredniczenia w egzocytozie podstawno-bocznej. Postulowaliśmy, że następująca sekrecja enzymów trawiennych w przestrzeni śródmiąższowej może spowodować zapalenie trzustki. W przypadku braku VAMP8 zapobiega się złożeniu tego kompleksu egzocytarnego, zmniejszając udział egzocytozy podstawno-bocznej w alkoholowym zapaleniu trzustki. Uważa się również, że VAMP8 uczestniczy w fuzji ZG-ZG, w tym sekwencyjnej egzocytozie, która występuje przy wierzchołkowym i podstawno-bocznym PM. Uważa się, że VAMP2 pośredniczy w egzocytozie wierzchołkowej, to znaczy w fuzji ZG z apical PM. Po pierwsze, VAMP8 nie jest wymagany do egzocytozy ZGs z apical PM jako takim, co jest poparte następującymi dowodami. Submaksymalne Cch (3. M) pozostało w stanie stymulować uwalnianie amylazy z Vamp8. /. acini, aczkolwiek mniej niż WT acini. Obrazowanie FM1-43 wykazało, że egzocytoza wierzchołkowa może mieć miejsce w wierzchołkowym świetle w Vamp8. /. acini, ale w mniejszym stopniu niż w WT acini. EM wykazało, że ilości ZG upakowane w wierzchołkowych biegunach zostały zmniejszone po stymulacji Cch w Vamp8. /. acini, powodując poszerzenie kanalika przewodowego, jak zaobserwowano w WT acini. VAMP8 nie będzie wiązał Syn-2, jak wcześniej pokazano (15). Zamiast tego, pokazujemy, że w przypadku egzocytozy wierzchołkowej prawdopodobnie pośredniczy wiązanie apikalne PM Syn-2 (31) z VAMP2, przypuszczalnie z ZG zadokowanych na szczytowym PM. Co ciekawe, Syn-2 nie utworzyłby trójskładnikowego kompleksu SNARE z VAMP2 i SNAP-23 aż do stymulacji Cch
[przypisy: dolargan ulotka, allegro pok, embolizacja naczyniaka ]