Terapia nowotworowa u myszy poprzez celowanie antygenem w nowatorską lektynę typu C ograniczoną do DC ad 9

Eksperymenty prezentacyjne MHC klasy II będą ułatwione przez konstruowanie rekombinowanych przeciwciał zaprojektowanych tak, aby zawierały odpowiednie epitopy, jako pionierem innych (23). Chcieliśmy ocenić potencjał kierowania DNGR-1 w indukcji odpowiedzi CTL i immunoterapii nowotworów, a zatem zbadać koniugaty antygenu i mAb anty-DNGR-1 pod osłoną anty-CD40, co zapewnia dodatkowe sygnały dla immunogenności (23). , 24). Protokół ten był wyjątkowo skuteczny w indukowaniu specyficznej aktywności efektorowej CTL z naiwnego repertuaru komórek poliklonalnych T, mierzonego za pomocą wielu odczytów. Tak więc, 2 .g anty-DNGR-1Al, odpowiadające 10 15 ng peptydu SIINFEKL, plus anty-CD40 (lub poli I: C) doprowadziło do dużego rozszerzenia tetrameru pozytywnego CD8 + T OVA / H-2Kb. komórki, które produkowały IFN-y i zabijają cele załadowane peptydem in vivo lub po ponownej stymulacji in vitro. Dla porównania 100-krotny nadmiar wolnego S1 nie wywoływał żadnej mierzalnej odpowiedzi w tych samych warunkach. Wyniki te są porównywalne z wynikami otrzymanymi dla anty-DEC-205, w których niewielkie ilości docelowego antygenu podobnie indukują silne odpowiedzi CTL, o ile podawany jest bodziec aktywacyjny DC (24). Aby przetestować skuteczność tego protokołu w modelu guza, wybraliśmy czerniaka B16, słabo immunogennego nowotworu myszy, który jest notorycznie trudny do leczenia (47. 49). Z tego powodu zaczęliśmy od zmodyfikowania B16 w celu ekspresji OVA jako obcego antygenu. Pojedyncze podanie anty-DNGR-1 (3l + anty-CD40 działało w sposób profilaktyczny, aby zapobiec wszczepieniu B16-OVA, nawet gdy podano je miesiąc przed prowokacją guza. Ten sam protokół można również stosować do terapii nowotworowej, lecząc myszy po podaniu prowokacji B16-OVA. Jednakże, aby było to bardziej odpowiednie dla terapii przeciwnowotworowej, ważne było ustalenie, czy można również uzyskać odporność przeciwko odpowiednim antygenom nowotworowym. Osiągnięto to przez sprzężenie anty-DNGR-1 z peptydami odpowiadającymi antygenom różnicowania melanocytów, które mogą działać jako antygeny B16 odrzucania u myszy H-2b (47. 49). Co godne uwagi, pojedyncze podanie takich koniugatów razem z poli I: C plus anty-CD40 było wystarczające, aby przełamać tolerancję na siebie, indukując startowanie CTL i eradykację B16, nawet gdy podawano w trybie terapeutycznym 3 dni po prowokacji nowotworowej. Jest to rygorystyczny test, ponieważ adoptywne przeniesienie CTL swoistych dla antygenów czerniaka jest na ogół przeprowadzane do 3 dnia po dożylnej inokulacji komórek B16 w eksperymentach terapeutycznych (49). Ponieważ generowanie aktywnego CTL trwa kilka dni, nasze wyniki sugerują, że ukierunkowanie antygenu przez DNGR-1 wraz z odpowiednim adiuwantem jest silnym środkiem do generowania odpowiedniej odporności przeciwnowotworowej, którą można wykorzystać jako strategię immunoterapeutyczną dla raka. To, czy taka immunizacja ostatecznie prowadzi do autoimmunizacji, jest obecnie oceniane, chociaż należy zauważyć, że bielactwo nie rozwijało się w krótkim czasie w naszych eksperymentach z nowotworem (D. Sancho i C. Reis e Sousa, niepublikowane obserwacje). Ważnym aspektem w celowaniu antygenem jest to, czy cel jest zdolny do modulowania funkcji DC. Pod tym względem DNGR-1 ma resztę tyrozyny w swoim wewnątrzkomórkowym ogonie w kontekście, który przypomina motyw hemitam znaleziony w dektynie-1 (35). Niedawno wykazaliśmy, że dectin-1 może wykorzystywać ten motyw do sprzęgania się z kinazą Syk i że agoniści sygnału dektyny-1 przez Syk promują aktywację DC (58, 59). Jednak żadne z przeciwciał anty-DNGR-1 nie jest zdolne do pobudzania aktywacji DC in vitro lub in vivo, jak zmierzono przez regulację w górę cząsteczek kostymulujących lub indukcję cytokin (dane nie przedstawione). Ponadto, leczenie anty-DNGR-1 nie zmienia odpowiedzi DC na bodźce heterologiczne, takie jak ligacja poli I: C lub CD40 (dane nie przedstawione). Obserwacje te sugerują, że mAb anty-DNGR-1, przynajmniej w postaci rozpuszczalnej, nie wywołują sygnalizacji przez receptor. Podobnie, przeciwciała przeciwko dektynie-1 nie działają jako agoniści dla tego receptora, prawdopodobnie dlatego, że nie wywołują stopnia usieciowania koniecznego do osiągnięcia produktywnej sygnalizacji (59). Dlatego nie zdziwiło nas, że celowanie przez DNGR-1 pod nieobecność adiuwanta nie indukuje odporności, jak podano w przypadku ukierunkowania antygenu za pośrednictwem DEC-205 (23, 24, 30. 32). W rzeczywistości nie mamy obecnie dowodów na to, że antygen skierowany na DNGR-1 wywołuje jakościowo odmienną odpowiedź immunologiczną od ukierunkowania antygenu na DEC-205 (D. Sancho, OP Joffre, C. Reis e Sousa, niepublikowane obserwacje). Jednak potrzebne będą dalsze badania w celu ustalenia, czy, podobnie jak celowanie DEC-205, celowanie DNGR-1 indukuje tolerancję krzyżową i czy DNGR-1 może zatem stanowić obiecujący cel nie tylko do indukowania odporności, ale także do promowania niewydolności immunologicznej. Metody Myszy
[podobne: embolizacja naczyniaka, cystoskopia boli, erytrol opinie ]