Terapeutyczna supresja inicjacji translacji moduluje chemosensitivity w mysim modelu chłoniaka ad 5

Immunoblotting dla eIF4A we frakcjach z tych gradientów ujawnił, że silvestrol spowodował przejście eIF4A w cięższe frakcje sedymentacyjne (Figura 4B). To przesunięcie nie było obserwowane dla podjednostek eIF4E lub eIF4G1 eIF4F (Figura 4B). Traktowanie ekstraktów komórkowych za pomocą nukleazy mikrokokowej przed odwirowaniem zapobiegło przesunięciu eIF4A w kierunku cięższych frakcji (Figura 4B). Te wyniki sugerują, że silvestrol stymuluje aktywność wiązania eIF4A z RNA in vivo. Figura 4Silvestrol indukuje połączenie eIF4A do wrażliwych na RNA-e ciężkich kompleksów sedymentacyjnych in vivo. (A) Wpływ silvestrolu na polibiałomy komórek Jurkat. Komórki Jurkat wystawiono na działanie nośnika (MeOH) lub 0,2. M silvestrolu przez 60 minut. Ekstrakty komórkowe przygotowano i traktowano nukleazą mikrokokową (MN) tam, gdzie to wskazano. Reakcje rozdzielono na 10% -50% gradientów sacharozy przez odwirowanie w rotorze SW40 przy 150 000 g przez 2 godziny. Frakcje zebrano z gradientów i monitorowano detektorem UV ISCO UA-6. (B) Western bloty demonstrujące pozycję migracji eIF4A, eIF4E i eIF4G1 w frakcjach sacharozy zebranych z nietraktowanych lub poddanych obróbce MN lizatów otrzymanych z komórek eksponowanych na MeOH lub 0,2. M silvestrol. Silvestrol odwraca chemooporność, w której pośredniczy inaktywacja PTEN lub nadekspresja eIF4E w chłoniakach E (3 -Myc. Model mysiego chłoniaka E. -Myc jest silnym, genetycznie zdefiniowanym systemem do badania działania leków in vivo. Aktywacja sygnalizacji Akt w tym przedklinicznym modelu przyspiesza proces onkogenezy i promuje chemooporność (9). Hamulan mTOR rapamycyna jest zdolny do modulowania wrażliwości na doksorubicynę i cyklofosfamid w E (3 -Myc / myr-Akt i Pten + / y E y-Myc, ale nie w E (3-Myc / eIF4E, chłoniaki, co sugeruje, że znaczna część sygnalizacja przeżycia jest mediowana przez mTOR i eIF4E (9, 10). Aby zbadać konsekwencje hamowania rekrutacji rybosomów na chemosensitivity, badano silvestrol u myszy z chłoniakami o różnych genotypach. Stwierdziliśmy, że codzienne iniekcje silvestrolu w ciągu 8 dni były dobrze tolerowane przez myszy i nie powodowały immunosupresji, utraty masy ciała lub upośledzonej czynności wątroby (R. Cencic i J. Pelletier, niepublikowane obserwacje). Doksorubicynę i rapamycynę synergizowano u myszy niosących nowotwory Pten + / AE-Myc i wydłużono czas przeżycia wolnego od nowotworu do 12-16 dni (Figura 5A, P <0,0001 dla rapamycyny plus doksorubicyna w porównaniu z samą rapamycyną lub doksorubicyną). Jako pojedynczy czynnik, silvestrol nie wykazywał aktywności przeciwko chłoniakom Pten + / AE-Myc, ale działał synergicznie z doksorubicyną, przy czym wszystkie zwierzęta osiągały remisje, które trwały do 16 dni (Figura 5A, P <0,001 dla silvestrolu i doksorubicyny względem silvestrolu lub doksorubicyny; sam). Nie zaobserwowano synergii między silvestrolem i doksorubicyną w chłoniakach E (3-Myc / Bcl-2, co sugeruje, że obserwowany efekt może być specyficzny dla guzów, w których następuje deregulacja translacji (Figura 5B). Ponieważ chłoniaki E. -Myc / eIF4E są oporne na połączenie leczenia rapamycyną i doksorubicyną (9) (Figura 5C), testowaliśmy zdolność silvestrolu do uwrażliwienia nowotworów tego genotypu na doksorubicynę. Chłoniaki E. -Myc / eIF4E nie reagowały na sam silvestrol (Figura 5C). Doksorubicyna lub połączenie remisji wywołanych doksorubicyną / rapamycyną u około 60% zwierząt, które trwały średnio tylko około 4 dni (Figura 5C). Połączenie silvestrolu i doksorubicyny powodowało dłuższe przeżycie wolne od nowotworu niż w przypadku pojedynczego czynnika, przy czym wszystkie zwierzęta osiągały remisje trwające do 25 dni (Figura 5C, P <0,001 dla silvestrolu i doksorubicyny względem samego silvestrolu lub doksorubicyny). Wyniki te wyraźnie wskazują, że leczenie silvestrolem i doksorubicyną jest bardziej skuteczne niż rapamycyna i doksorubicyna w tym typie nowotworu. Figura 5Silvestrol zmienia wrażliwość na chemię w guzach Pten + / yEa-Myc i E (3-Myc / eIF4E in vivo. (A) Silvestrol uwrażliwia nowotwory Pten + / YE-Myc na działanie doksorubicyny in vivo. Wykres Kaplana-Meiera pokazujący przeżycie wolne od nowotworu myszy z guzami Pten + / YE-Myc po leczeniu doksorubicyną (Dxr, stała czarna linia; n = 10), rapamycyny (Rap, przerywana zielona linia; n = 9), rapamycyny i doksorubicyna (Rap + Dxr, stała niebieska linia, n = 8), silvestrol (Sil, stała czerwona linia, n = 10) lub silvestrol i doksorubicyna (Sil + Dxr, przerywana czerwona linia, n = 8). (B) Silvestrol nie zmienia odpowiedzi na lek w guzach E (3-Myc / Bcl-2 in vivo. Wykres Kaplana-Meiera pokazujący przeżycie wolne od guza myszy z guzami E. -Myc / Bcl-2 po traktowaniu Dxr (n = 9), Sil (n = 7) lub Sil + Dxr (n = 8). (C) Silvestrol uwrażliwia guzy E (3-Myc / eIF4E na działanie Dxr in vivo [patrz też: szpik w kości krzyżówka, dehydratacja krążków międzykręgowych leczenie, tureckie allegro ]